河魨毒的檢測

海洋生物毒廣泛存在於海洋動物中，而常造成食物中毒的主要是河魨毒、麻痺性貝毒、熱帶海魚毒、下痢性貝毒等，因此普遍受到世界各國學者專家的關注。在海洋生物毒中，以水產毒素河魨毒和麻痺性貝毒最常見。河魨毒最早發現存在於河魨中，並命名為 tetrodotoxin，目前已知河魨毒廣泛存在於河魨類、蝦虎類、織紋螺類、玉螺類、榧螺類、扁蟹類、二枚貝類、海星類等水產動物中。

在國內，河魨毒常引起食物中毒而導致死亡事件，因此甚被重視。河魨毒是一種神經毒，中毒症狀是噁心、嘔吐、麻木刺痛（包括口、舌和四肢）、頭暈無力、具飄浮感、運動失調、吞嚥困難。嚴重個案甚至出現呼吸麻痺、低血壓、心跳減慢等現象，潛伏期長短受進食毒素量的影響。中毒後，若能支撐超過 18 ~ 24 小時，通常預後良好。為了水產品的食用安全性，檢測樣品中是否含有河魨毒極為重要，以下說明檢測河魨毒的方法。

檢測技術

小白鼠生物毒性檢定法：測量檢體的體重、體長後，即刻解剖中腸腺和可食部分。樣品加入等體積醋酸溶液並均質化後，以沸水水浴加熱 10 分鐘，萃取出粗毒溶液，並稀釋成不同倍數的溶液。再以腹腔注射方式把1毫升溶液打入 4 周齡 18 ~ 20 克的 ICR 系雄性小白鼠，觀察其中毒特徵，例如舉尾、抽筋、圈狀運動和呼吸困難，並記錄其死亡時間和稀釋倍數，以對照河魨毒生物檢定表計算毒性。

毒性單位是老鼠單位，一個老鼠單位是指在 30 分鐘可殺死 20 克雄性小白鼠的毒劑量。比較粗毒溶液各稀釋濃度對死亡時間作圖的曲線與標準品河魨毒的曲線，當兩條曲線重合或平行時，可得知粗毒溶液中可能含有河魨毒。因此把患者所吃的殘餘檢體依上述方法測其毒性，就可得知檢體中每公克具有多少老鼠單位的河魨毒毒性。

薄層色譜分析法：薄層色譜分析法是一種能把不同物質分離和鑑定化學成分的方法，它的成本較其他方法低，已廣泛應用在醫藥化學分析中。

薄層色譜分析的基本配備是展開槽、槽蓋、薄層板和溶劑。放進薄層以前，先把砒啶：乙酸乙酯：醋酸：水（15：5：3：4）溶劑系統加入，並使槽密閉，以使槽內有飽和的溶劑蒸氣。離薄層底部 2 公分處，以鉛筆劃線，並把標準品和樣品點上去，使其浸入溶劑中。溶劑因毛細作用而被吸上去，樣品裡的各成分便以不同速率向上移，最後檢驗斑點。以氫氧化鉀噴霧後在攝氏 110 度下加熱 5 分鐘，在 365 nm 紫外光下可觀察到黃色（河魨毒）和藍色（脫水河魨毒）的螢光。

這項方法的優點是操作所需時間短，分離後各成分可回收供定量及定性的分析，缺點是靈敏度不高。

電泳法：每一種物質組成的成分大都帶有電荷，而電泳是利用電流來移動分子，依其移動距離而判斷出分子種類的方法。醋酸纖維薄膜電泳是以醋酸纖維薄膜為擔體，以鹼性緩衝液使河魨毒略帶正電，利用電流使它與其他物質分離。另把氫氧化鉀噴灑在完成泳動的電泳片上，並加熱反應 10 分鐘 ，可呈現與薄層分析法同樣的螢光。

高效能液相層析法：高效能液相層析目前已廣泛使用於各種化學物質的純化、定性和定量分析上。層析法是利用樣品在兩相（固定相和移動相）間的極性、吸附性的不同而達到分離效果。本系統是由逆向層析管、反應液的高壓幫浦、恆溫箱、反應蛇管和螢光偵測器組成，以含有界面活性劑的磷酸緩衝液沖洗 C18 管柱的非極性層析管使河魨毒分離，溶出液再混合強鹼並加熱使河魨毒形成 C9 鹼基，便可利用吸收波長 381 nm，放射波長 505 nm 的螢光偵測器加以測定。